Определение остаточного азота (по Кьельдалю)
Принцип определения: в результате сжигания безбелкового фильтрата крови азот низкомолекулярных азотистых соединений переходит в состав иона NH4. Количество азота устанавливается по количеству кислоты, необходимой для связывания образовавшегося аммония.
Реактивы:
1) трихлоруксусная кислота (ТХУ), 20% раствор;
2) концентрированная чистая серная кислота;
3) сернокислая медь кристаллическая;
4) кристаллический химически чистый сульфат натрия;
5) едкий натр без примеси азотной кислоты (27% раствор, удельный вес 1,35);
6) точный (титрованный) раствор N/10 серной кислоты;
7) точный титрованный раствор едкого натра (N/50);
8) раствор метилрота.
К 3 мл оксалатной крови или сыворотки крови добавляют 3 мл ТХУ и 3 мл воды. В течение 10 минут слегка помешивают и затем отфильтровывают осадок. К количеству фильтрата, соответствующему 1 или 2 мл крови или сыворотки, прибавляют 1 мл H2S04 и щепотку сернокислой меди и сернокислого натрия, играющих роль катализатора реакции. Сжигание производят в вытяжном шкафу сначала на умеренном, а затем на более сильном пламени. Процесс считается законченным, когда смесь становится прозрачной и приобретает голубой оттенок. При сжигании необходимо предотвращать высыхание содержимого, которое обусловливает очень значительную ошибку определения. После окончания сжигания раствору дают остыть и прибавляют несколько миллилитров дистиллированной воды.
Для количественного определения образовавшегося при сжигании аммония используется установка (См. рис.).
 |
Установка для определения азота по Кьельдалю. 1 - парообразователь; |
Вытеснение аммиака из исследуемой пробы производится в колбе 3. Образовавшийся аммиак перегоняется водяным паром, поступающим из колбы 1 в холодильник, и оттуда в виде раствора стекает в приемник 7, содержащий 20 мл титрованной N/10 серной кислоты и 1-2 капли индикатора метилрота или нитрофенона.
Колба 1 служит парообразователем. Для предупреждения попадания следов аммиака в водяные пары, осуществляющие перегонку измеряемого количества аммиака, образовавшегося при сжигании, воду, наливаемую в колбу 1, подкисляют серной кислотой. Подогревание колбы происходит на газовой горелке или на электрической плитке. Колба закрыта резиновой пробкой, в которую вставлен тройник; один из концов его заканчивается резиновой трубкой, а другой связан со стеклянной трубкой 2, проникающей через одно из отверстий резиновой пробки до дна колбы Кьельдаля 3. На этой трубке имеется вертикальная насадка, к которой присоединена резиновая трубка, несущая небольшую воронку с краном. Через второе отверстие в колбу Кьельдаля вставляется «ловушка», соединенная со змеевиком холодильника, конец которого опущен в приемник 7. Холодильник должен быть сделан из тугоплавкого стекла, не отдающего щелочи. Для предотвращения ошибок за счет щелочи, которая может поступать из холодильника, перед определением через систему перегоняют водяной пар до тех пор, пока жидкость, оттекающая из холодильника, при проверке на лакмус не будет обнаруживать совершенно нейтральную реакцию. Исследуемую пробу помещают в колбу 3. Нижний конец змеевика погружают в кислоту, помещенную в приемник. Через воронку в колбу Кьельдаля вливают 4-5 мл щелочи. Тотчас же образующийся аммиак перегоняют водяным паром 10 минут. Конец перегонки устанавливается по появлению нейтральной реакции в жидкости, оттекающей из холодильника. Для этой цели к выводному отверстию змеевика подводят лакмусовую бумажку. При обнаружении щелочной реакции конец змеевика опускают в кислоту и перегонку продолжают. При обнаружении нейтральной реакции перегонка проводится еще в течение минуты при одновременном ополаскивании холодильника снаружи холодильной водой. Для окончания перегонки открывают парообразователь и прекращают нагревание. Содержимое приемника титируют из микробюреток щелочью (N/50). При этом рекомендуется ставить параллельные пробы.
Остаточный азот (в мг%) определяется по формуле = (количество кислоты*1,4*100)/количество крови или сыворотки.
 |
 |